Compiti ed esercitazioni VERIFICATO
laboratorio biochimica
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Riassunto:
- Determinazione concentrazione proteica utilizzando il saggio di Bradford: 748,4 mg/ml.
- Preparazione estratto proteico per SDS-PAGE: diluire a 4 mg/ml e prelevare 50 μl per preparare 10 ml.
- Analisi Western Blot: studi invitro su composti nutraceutici (simarina, curcumina, vitamina E, DHA, colina) in modello di steatosi epatica; utilizzo del reagenti R0278 e anticorpi specifici per osservare proteine come Beta-actina e SOD-2; risultati mostrano riduzione significativa della SOD-2 in presenza di DHA e aumento di PPARα in presenza di acidi grassi, più evidente con la colina.
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- Calcolo della concentrazione proteica: dall'assorbanza misurata (0,389) e dalla retta di calibrazione ottenuta (y=0,0005x+0,0148), si determina una concentrazione proteica di 748,4 mg/ml.
- Preparazione dell'estratto proteico per SDS-PAGE: l'estratto viene denaturato utilizzando un buffer concentrato 2X e diluito a 4 mg/ml di proteina con sample buffer; si calcola che per preparare 10 ml di estratto proteico a concentrazione 4 mg/ml, è necessario prelevare 50 μl.
- Analisi Western Blot: lo scopo della ricerca è valutare l'effetto combinato di composti nutraceutici su un modello invivo di steatosi epatica; Beta-actina è utilizzata come proteina housekeeping per normalizzare i risultati; si osserva una riduzione significativa della SOD-2 in presenza di DHA e un aumento di PPARα in presenza di acidi grassi, specialmente con la colina.
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