Appunti VERIFICATO
Prima Lezione - Metodologie per la produzione e caratterizzazione di biomolecole
Università degli Studi di Napoli - Federico II scienze chimiche Curriculum indirizzo chimica dell' ambiente e dei beni culturali 2021
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Di cosa parla
- Il clonaggio molecolare implica l'inserimento di DNA estraneo in batteri utilizzando vettori, che contengono siti di restrizione riconosciuti da enzimi di restrizione per unire inserto e vettore.
- Gli enzimi di restrizione tagliano il DNA in sequenze palindromiche, creando estremità coesive o sfalsate; la ligaasi chiude le lacune formate.
- Il screening delle colonie si effettua tramite ibridazione con sponde radiografiche per identificare solo le colonie contenenti il DNA di interesse, ma non più praticato in laboratorio.
- I vettori moderni contengono resistenza ad un antibiotico, DNA a doppia elica circolare e multipli siti di restrizione; sono utilizzati per trasformare batteri in colonie selezionate.
- La trasformazione delle cellule batteriche può avvenire attraverso l'elettroporazione o la trasformazione chimica con CaCl2, rendendo le cellule competenti a ricevere DNA esterno.
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