Appunti VERIFICATO

Metodi trasfezione

Università degli Studi di Torino biotecnologie mediche 2021
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Anteprima pagina 1 — Metodi trasfezione

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Di cosa parla

  • I metodi chimici di trasfezione, come quello al calcio fosfato e il DEAE destrano, sfruttano la formazione di coprecipitati tra reagenti o polimeri cationici e DNA per favorire l'endocitosi del materiale genetico nelle cellule ospiti.
  • Le metodiche basate sui liposomi utilizzano vescicole lipidiche che mimano le membrane biologiche, fondendosi con la membrana cellulare per rilasciare il contenuto tramite endocitosi o fusione diretta, includendo varianti magnetiche per una rapida selezione delle cellule trasfettate.
  • L'elettroporazione è un metodo fisico che applica campi elettrici transitori alle cellule su cuvette specializzate per creare pori temporanei nella membrana attraverso i quali il DNA entra prima della chiusura dei canali e del ripristino dell'integrità cellulare.
  • La microiniezione permette l'inserimento diretto di DNA o proteine singole nelle cellule tramite microaghi sotto controllo microscopico, risultando ideale per studi morfologici specifici ma poco adatta alla produzione su larga scala necessaria alle analisi biochimiche quantitative.
  • I metodi fisici come la microiniezione e il micro-gun offrono alternative valide ai sistemi chimici quando è necessario trasfettare tipi cellulari resistenti o tessuti complessi, sebbene spesso comportino costi strumentali più elevati o stress cellulare maggiore rispetto alle tecniche a basso impatto.

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