Dispense VERIFICATO
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Università degli Studi di Roma - La Sapienza tecniche di laboratorio biomedico (abilitante alla professione sanitaria di tecnico di laboratorio biomedico) 2020
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Di cosa parla
- Le tecniche di biologia molecolare coinvolgono l'ibridazione degli acidi nucleici e la PCR. L'ibridazione in situ, Southern, Northern e Dot blot permettono il riconoscimento e localizzazione specifica di acidi nucleici.
- Il Southern blot utilizza DNA purificato per studiare modificazioni del DNA genico, mentre il Northern blot analizza l'RNA. Il dot blot è un sistema rapido per lo studio quantitativo di DNA e RNA.
- La PCR amplifica piccoli segmenti di DNA in copie numerose, utile per riconoscere sequenze presenti in piccole quantità o per screening di mutazioni puntiformi. Può essere eseguita su DNA parzialmente degradato.
- L'ibridazione degli acidi nucleici si basa sulla specificità della sonda complementare al bersaglio, marcata con un tracciante. Le sonde possono essere DNA, RNA o oligonucleotidi sintetici di lunghezza variabile.
- La reazione di ibridazione dipende dalla sequenza e dal contenuto in G:C delle catene ibridate, stabilita dal valore Tm. L'ibridazione può avvenire in soluzione o su supporti solidi come la nitrocellulosa.
- L'ibridazione in situ utilizza tecniche autoradiografiche o microscopiche per localizzare sequenze di DNA o RNA in tessuti, applicabile alla CISH e FISH. Queste tecniche sono fondamentali nella citogenetica e istopatologia.
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