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DETERMINAZIONE DELLA KM DELL'ENZIMA ADA
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Determinazione della Km dell'enzima adenosina deaminasi (ADA) utilizzando l'adenosina come substrato. Si misura la trasformazione enzimatica a 265 nm, eliminando l'interferenza dell'inosina a 260 nm. Si eseguono le misurazioni con concentrazioni di adenosina comprese tra 5-80 µM e si aggiunge l'ADA. I valori vengono calcolati in Excel e GraphPad per determinare Km e Vmax.
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- Dettaglio sperimentale della determinazione della Km dell'ADENOSINA DEAMINASI (ADA): utilizzo dello spettro UV per misurare l'estinzione a 265 nm, eliminando l'influenza dell'inosina.
- Misurazioni delle concentrazioni di adenosina variabili (5-80 µM) in soluzioni composte da adenosina, tampone fosfato e ADA, leggendo l'assorbimento a 260 nm e correggendo con il coefficiente di estinzione.
- Aggiunta dell'enzima ADA alle cuvette, misurazione della V0 ogni 10 secondi per 2 minuti, calcolo della ΔA/min nel periodo lineare, determinazione dei doppi reciproci e analisi con Excel e GraphPad.
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