Dispense VERIFICATO
PCR
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Di cosa parla
- PCR: procedimento per amplificare segmenti specifici di DNA partendo da quantità minime, utilizzando denaturazione, annealing e estensione.
- Elementi fondamentali: primers (oligonucleotidi), Taq DNA polimerasi, dNTPs, Mg2+, apparecchio per PCR.
- Caratteristiche dei primers: lunghezza, contenuto di G+C, codone conservato, evitare sequenze interne complementari.
- Applicazioni della PCR: identificazione patogeni, OGM, analisi DNA in medicina legale, diagnosi prenatale e tumorali, clonaggio e sequenziamento di DNA.
- Tipi di PCR: RT-PCR (valutare espressione genica), PCR asimmetrica (DNA a singolo filamento), PCR competitiva, nested PCR (specificità), multiplex PCR (contemporanea amplificazione diversi segmenti), PCR real time (seguire in tempo reale).
- Trascrizione inversa: conversione mRNA in cDNA utilizzando trascrittasi inversa.
- RT-PCR: combinazione di trascrizione inversa e PCR per valutare livello di espressione genica.
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