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sbobine biologia molecolare applicata
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Il corso di Biologia Molecolare Applicata illustra i principi del clonaggio genetico, focalizzandosi sull'uso di vettori di espressione batterici e eucariotici per la sintesi di proteine ricombinanti come insulina o vaccini. Vengono descritte le tecniche fondamentali quali la purificazione dei plasmidi, l'utilizzo di enzimi di restrizione e ligasi per creare DNA ricombinante, e il processo di trasformazione batterica mediato da shock termico per selezionare le cellule competenti tramite marcatori di resistenza agli antibiotici.
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- I vettori di clonaggio sono plasmidi artificiali dotati di un'origine di replicazione (ORI-C) e geni di selezione come la resistenza agli antibiotici, utilizzati per inserire frammenti eterologi tramite enzimi di restrizione e ligasi.
- Il processo di trasformazione batterica prevede il trattamento con sali di calcio e shock termico per indurre l'assunzione del DNA in cellule competenti, seguita dalla selezione delle colonie su terreni contenenti antibiotici specifici.
- Per distinguere i plasmidi vuoti da quelli ricombinanti si utilizzano metodi classici basati sulla perdita della resistenza a un antibiotico (es. pBR322) o tecniche blu-bianco che sfruttano l'attività enzimatica del gene lacZ nel plasmide pUC8.
- Le applicazioni biotecnologiche includono la produzione di proteine ricombinanti come insulina e vaccini, lo sviluppo di animali transgenici e topi knockout per studi genetici, nonché tecniche avanzate come l'interferenza a RNA con siRNA.
- Le tecnologie di sequenziamento del DNA hanno permesso il completamento del Progetto Genoma Umano e la realizzazione del Progetto EST per l'identificazione di geni tramite l'analisi dell'mRNA.
- La ricerca si estende alla terapia genica per malattie come la sindrome ADA e la fibrosi cistica, all'utilizzo di anticorpi monoclonali umanizzati e allo sviluppo di vettori shuttle per lievito e vaccino HBV.
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