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lezione Zebrafish 2
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Riassunto AI · si legge in un minuto
L'approccio dell'Oligo-antisenso per il Knock-down permette di silenziare la produzione proteica senza modificare il genoma. Iniettando oligomeri antisenso in ovociti fecondati, si ottiene l'assenza della proteina di interesse in modo temporaneo (4-5 giorni). Questo metodo è veloce e utile per studiare lo sviluppo e le patologie ma non sostituisce la manipolazione genica definitiva. Si può anche overesprimere un gene o simulare mutazioni umane in zebrafish. Per modifiche permanenti, si usano meganucleasi come Fok1, TALEN, o CRISPR-Cas9 che introducono tagli specifici nel DNA, causando inserzioni/delezioni non corrette durante la reparazione.
Leggi il riassunto completo
- Il knock-down utilizza oligomeri antisenso per silenziare il gene di interesse senza modificare il genoma, ottenendo effetti temporanei fino a 4-5 giorni.
- L'overespressione del gene può essere raggiunta iniettando messaggeri sintetici, permettendo l'esplorazione rapida delle sue funzioni prima di procedere con modifiche geniche.
- I morpholini possono essere utilizzati per bloccare l'espressione endogeno del gene e testare l'effetto di mutazioni umane in zebrafish, fornendo dati preliminari per ulteriori studi.
- Per modificare il genoma, si usano nucleasi come Fok1, TALEN o CRISPR-Cas9 che introducono tagli specifici nel DNA, inducendo l'apertura di "indels" durante la riparazione del danno.
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