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introduzione alle tecniche di laboratorio
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Riassunto:
La produzione di proteine ricombinanti implica l'estrazione da ospiti di espressione (batteri, lieviti, cellule animali). Parametri cruciali includono composizione del terreno, temperatura, agitazione e ossigenazione. Per le cellule batteriche si utilizzano bioreattori per "scale up". Nelle cellule animali si lavora con colture in sospensione o adesione. La purificazione implica centrifugazione, lisi cellulare (meccanica, fisica, chimica) e separazione di componenti. Tecniche preparative precedono le analitiche per valutare purezza e qualità della proteina.
Leggi il riassunto completo
- Metagenomica: studio diretto dei materiali genetici da campioni ambientali per ottenere proteine industrialmente importanti.
- Ospiti di espressione per proteine ricombinanti: batteri (E. coli), lieviti, cellule animali (CHO cells).
- Tecnologie per le cellule ospite: preparazione della coltura glicerinata, pre-inoculo e inoculo con induttore, scale up a bioreattori, parametri essenziali come composizione del terreno, temperatura, agitazione e ossigenazione.
- Purificazione proteica: centrifugazione per separare cellule e prodotti, lisi cellulare meccanica (benchtop homogenizer, estrusore a pressione) e fisica (congelamento/scongelamento), chimica (detergenti).
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