Appunti VERIFICATO
Appunto di spettrometria di massa
Università degli Studi di Napoli - Federico II corso di laurea in biotecnologie biomolecolari e industriali 2021
Nessun voto ancora
Stai vedendo l'anteprima delle prime pagine. Sblocca tutte le pagine con l'abbonamento.
Di cosa parla
- La spettromettria di massa (MS) è una tecnica analitica usata per misurare le masse molecolari e determinare la struttura di composti, anche in piccole quantità.
- Si basa sull'ionizzazione del campione, l'accelerazione degli ioni in fase gassosa, la loro separazione in base al rapporto massa/carica (m/z) e la rivelazione. È una tecnica distruttiva.
- Gli spettrometri sono composti da una sorgente (S), un analizzatore (A) e un rivelatore (R), operando sotto vuoto spinto.
- Le tecniche di ionizzazione si classificano in "Hard" (es. Electron Impact, E.I., che causa frammentazione intensa, utile per informazioni strutturali) e "Soft" (che minimizzano la frammentazione).
- Chemical Ionization (C.I.) è "soft", usa gas reagenti per protonare le molecole, generando ioni pseudomolecolari MH⁺ più stabili, ideale per determinare il peso molecolare.
- Fast Atom Bombardment (F.A.B.) e Matrix-Assisted Laser Desorption Ionisation (MALDI) sono "soft" e adatte per composti polari, ad alto peso molecolare e termicamente instabili (biochimica). Utilizzano matrici liquide o solide e bombardamento (atomi o laser) per desorbire e ionizzare.
- Electrospray Ionization (E.S.I.) è "soft", opera a pressione atmosferica, nebulizzando soluzioni e generando ioni multicarica, eccellente per macromolecole biologiche.
- L'analizzatore separa gli ioni per m/z. I tipi includono:
- Settore magnetico (elettromagnetico, doppia focalizzazione) offre alta risoluzione (fino a 150.000).
- Quadrupolo seleziona ioni basandosi sulla stabilità delle loro oscillazioni.
- Trappola ionica intrappola e rilascia sequenzialmente gli ioni.
- Tempo di Volo (TOF) misura il tempo di transito degli ioni; i più leggeri arrivano prima, offrendo alta sensibilità e risoluzione.
- Risonanza Ciclotronica Ionica (FT ICR) è la tecnologia più avanzata, con risoluzioni estreme (10⁵-10⁷) grazie a campi magnetici elevatissimi.
- L'analisi degli spettri consente di identificare lo ione molecolare, i frammenti e processi di frammentazione per ricostruire la struttura. La risoluzione determina la massa esatta e la formula bruta, mentre i picchi isotopici aiutano a identificare gli elementi (es. Cl, Br).
- Il grado di insaturazione (G.I.) e la regola dell'azoto sono strumenti utili per dedurre la formula molecolare e la presenza di doppi legami/cicli.
- La spettrometria di massa TANDEM (MS/MS) utilizza due analizzatori in serie per studi strutturali approfonditi (es. sequenziamento di peptidi). Il primo seleziona uno ione precursore, che viene frammentato in una cella di collisione, e il secondo analizzatore separa i frammenti figli (MS^n).
Registrati e scarica subito 3 appunti gratis.