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Biologia molecolare degli eucarioti
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Sequenziamento del DNA: i primi metodi come Sanger e Maxam-Gilbert, ora sostituiti da Next Generation Sequencing (NGS) che produce molte sequenze brevi con errori. NGS include sequenziamento per ligazione, sintesi e pyrosequencing. Tecnologie successive come PacBio RS e Nanopore offrono soluzioni più avanzate ma costose.
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- Sequenziamento del DNA: permette l'analisi dei geni, della loro posizione e delle regioni regolatorie; i metodi di sequenziamento includono il Metodo Sanger (enzimatico) e Maxam-Gilbert (degradazione chimica), con Next Generation Sequencing (NGS) che produce molte sequenze brevi ma con errori.
- Metodo Sanger: basato sulla sintesi in vitro, utilizza ddNTPs come terminatori della catena; ha vantaggi come la precisione delle sequenze lunghe e svantaggi come il tempo necessario per l'analisi di poche sequenze alla volta.
- Next Generation Sequencing (NGS): produce molte sequenze brevi con alta frequenza di errori, utilizzata per studiare SNP, copy number variation dei geni, metilazione e siti di binding proteici; esistono piattaforme commerciali come Illumina Solexa, Roche 454 e SOLiD.
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