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Biologia molecolare degli eucarioti
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L'analisi dei geni inizia con il sequenziamento del DNA per determinare l'ordine delle basi azotate. Il sequenziamento è fondamentale per identificare geni, sequenze regolatrici e mutazioni responsabili di malattie umane. Due metodi principali sono il Sanger e il Gilbert; solo il Sanger è attualmente utilizzato. Questo metodo implica l'incorporazione selettiva di dideossinucleotidi tramite DNA polimerasi, generando frammenti di diversa lunghezza che terminano con la base corrispondente. Il sequenziamento capillare e il dye sequencing permettono una separazione più rapida dei frammenti. Recentemente, i tecnici del DNA hanno sviluppato tecniche di sequen
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- Analisi dei geni: il sequenziamento del DNA è fondamentale per identificare geni, sequenze regolatrici e mutazioni responsabili di malattie umane.
- Storia del sequenziamento: scoperta del DNA da Meischer alla fine del 1800, conferma della sua funzione genetica con la struttura a doppia elica di Watson e Crick nel 1953, sviluppo delle tecniche di Sanger e Gilbert negli anni '70.
- Metodo di Sanger: utilizza l'incorporazione selettiva di dideossinucleotidi durante la replicazione del DNA per generare frammenti di diversa lunghezza che terminano con un nucleotide specifico, separati in gel e letti dal fondo.
- Tecnologie moderne: evoluzione al sequenziamento capillare e l'uso di nucleotidi fluorescenti per identificare i vari frammenti, generando elettroferogrammi che permettono la lettura delle sequenze.
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