Appunti VERIFICATO
biologia molecolare II
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Di cosa parla
- Saggi di ibridazione: diretti (Northern/Southern blots) e inversi (Micro-array/Macro-array)
- Procedimento della Northern/Southern blot: estrazione del RNA/DNA, denaturazione, trasferimento su filtro, pre-ibridazione, ibridazione con sonde marcate, lavaggi a stringenza, scansionamento
- Vettori utilizzati (pGEM e pGEM7), PCR asimmetrica per quantificazione, DNA single strand per determinare senso di trascrizione e sequenziamento
- Normalizzazione: confronto segnali con trascritti interni come Gliceraldeide 3-fosfato deidrogenasi o Actina
- SLOT/DOT-blot: tecnica multi-analitica per identificare mutazioni puntiformi, utilizzo di sonde ASO specifiche e screening mutagenico
- RT-PCR: retrotrascrizione inversa associata a PCR, tre metodi di priming (specifico, oligo dT, random), applicazioni in clonazione, studi in vitro e quantificazione trascritti
- RT-PCR nelle banche a cDNA: utilizzo di oligo dT o random priming, degrado dell'ibrido RNA-cDNA da parte della trascrittasi inversa, applicazioni in analisi genomica
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