Riassunti VERIFICATO
Utilizzi e funzionamento PCR
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Di cosa parla
- La reazione a catena della polimerasi (PCR) sfrutta le proprietà enzimatiche della DNA polimerasi, come la necessità di uno stampo a filamento singolo e l'aggiunta di primer specifici, per amplificare esponenzialmente una regione target di DNA in pochi cicli termici.
- L'uso della Taq polimerasi estratta da Thermus aquaticus ha rivoluzionato la tecnica rendendola automatizzabile tramite cicli termostatici, poiché l'enzima resiste alle alte temperature necessarie per la denaturazione del DNA senza richiedere il suo continuo riassestamento.
- Dopo l'amplificazione, i frammenti di DNA vengono separati in base alla loro dimensione mediante elettroforesi su gel di agaroso, dove le molecole più piccole migrano più velocemente verso il polo positivo sotto l'azione di un campo elettrico.
- La visualizzazione delle bande di DNA separate sul gel avviene tramite l'intercalazione del bromuro d'etidio tra le basi nucleotidiche, che emette fluorescenza rossa-arancio quando illuminato con luce ultravioletta, permettendo il confronto con marker di peso molecolare noto.
- Grazie alla sua estrema sensibilità e specificità, la PCR è applicata in ambito clinico per la diagnosi precoce di infezioni virali come l'HIV e la tubercolosi, nonché per lo studio di mutazioni genetiche e traslocazioni cromosomiche associate a neoplasie.
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